試料情報
このページでは、これまでに論文発表したマテリアルのうち、お問い合わせが多いものについて、情報を掲載しています。
GATEWAYシステムによる発現ベクターの作製法
この図は、私たちの研究室で主に用いている、C末端側に蛍光タンパク質を融合させる発現ベクターの作製法です（Nat Protoc, 2010）。
興味のあるゲノムDNA断片あるいはcDNA断片をpENTR-L1/R5 Vectorにクローニングすれば、プロモーターを組み込んだpDEST Vectorと各種蛍光タンパク質を組み込んだpENTR-L5/L2 Vectorとの間で相同組換え反応を１回行うだけで、実験の目的に合ったさまざまな発現ベクターを容易に作製することができます。
この相同組換え反応は、InvitrogenのMultisite Gateway Systemを利用しています。Gatewayクローニングについての詳細はInvitrogenのウェブサイトを参照してください。
文献
Kuroyanagi H, Kobayashi T, Mitani S, Hagiwara M.
Transgenic alternative-splicing reporters reveal tissue-specific expression profiles and regulation mechanisms in vivo.
Nature Methods 3: 909-915, 2006.
Kuroyanagi H, Ohno G, Sakane H, Maruoka H, Hagiwara M.
Visualization and genetic analysis of alternative splicing regulation in vivo using fluorescence reporters in transgenic Caenorhabditis elegans.
Nature Protocols 5: 1495-1517, 2010.
Satomi Takei, Marina Togo-Ohno, Yutaka Suzuki, Hidehito Kuroyanagi.
Evolutionarily conserved autoregulation of alternative pre-mRNA splicing by ribosomal protein L10a.
Nucleic Acids Research 44: 5585-5596, 2016.
Rie Murayama, Mariko Kimura-Asami, Marina Togo-Ohno, Yumiko Yamasaki-Kato, Taeko K. Naruse, Takeshi Yamamoto, Takeharu Hayashi, Tomohiko Ai, Katherine G. Spoonamore, Richard J. Kovacs, Matteo Vatta, Mai Iizuka, Masumi Saito, Shotaro Wani, Yuichi Hiraoka, Akinori Kimura & Hidehito Kuroyanagi.
Phosphorylation of the RSRSP stretch is critical for splicing regulation by RNA-Binding Motif Protein 20 (RBM20) through nuclear localization.
Scientific Reports 8: 8970, 2018.
Tatsuya Fujikawa, Fumihiro Sanada, Yoshiaki Taniyama, Kana Shibata, Naruto Katsuragi, Nobutaka Koibuchi, Kaori Akazawa, Yuko Kanemoto, Hidehito Kuroyanagi, Kenzo Shimazu, Hiromi Rakugi and Ryuichi Morishita.
Periostin Exon-21 Antibody Neutralization of Triple-Negative Breast Cancer Cell-Derived Periostin Regulates Tumor-Associated Macrophage Polarization and Angiogenesis.
謝辞
ここで紹介しているVectorの作製には、次の方々からご供与いただいたマテリアルを利用しています。
Andrew Fire (Stanford Univ)
Atsushi Miyawaki (RIKEN)
Masaaki Muramatsu (TMDU)
Roger Y. Tsien (UC, San Diego)
Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Clontech
Invitrogen
TaKaRa
